Manuale d’uso / di manutenzione del prodotto Q HP del fabbricante GE
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Instructions 71-7149-00 AN HiTrap ion exchange columns GE Healthcare HiTrap SP HP , 1 ml and 5 ml HiTrap Q HP , 1 ml and 5 ml HiT rap ™ SP HP an d Hi T rap Q HP a re pre pac ked , rea dy to us e cat.
p. 2 Code No. Designation No. su pplied 17 - 1151 - 01 Hi T rap S P HP 5 x 1 ml 17 - 1152-01 HiTrap SP HP 5 x 5 m l 17 - 1153- 01 Hi T rap Q H P 5 x 1 ml 17 - 1154 -01 Hi T rap Q H P 5 x 5 ml Connectorkit Connectors supplied Usage No.
p. 3 1. Description Media properties SP Seph arose ™ H igh P er for ma nce an d Q Sep ha rose H igh P er fo rma nce are s tr ong ca ti on an d st ron g ani on ex cha nge rs re sp ec tiv ely . Bot h rem ain cha rge d and m ain tai n high c apa cit y over b roa d pH ra nge s.
p. 4 Ta b l e 1 . Hi T r ap SP HP a nd Hi T rap Q HP c olu mns c hara ct eri st ic s Co lum n vol ume s 1 ml o r 5 ml Co lum n dim ens io ns 0.7 × 2.5 c m (1 ml ) and 1 .6 × 2.5 c m (5 m l) T ota l ion ic ca pac ity 0.14– 0.20 m mo l (C l – )/m l me di um (Q) 0.
p. 5 2. Selection of ion exchanger and conditions Io n exch ang e chr oma tog rap hy is b ase d on a dso rpt io n and re ver sib le bi ndi ng of ch arg ed sa mpl e mo lec ule s to op pos ite ly ch arg ed gro ups at ta che d to an in so lub le ma tr ix .
p. 6 Strategy 1. Binding and elution of all sample components Bi ndi ng is a chi eved b y cho os ing a s tar t b uf fe r wit h a lo w pH for H iTrap SP HP or a h igh p H for Hi Trap Q HP . T he io nic s tre ngh t sho uld b e kep t as lo w as po ssi bl e to all ow al l com po nent s to b in d to th e ion ic ex chan ge (< 5 mS/cm ) .
p. 7 Th e buf fe ri ng io n sho uld c arr y th e sam e cha rge a s the i on ex cha nge g rou p an d sho uld h ave a pK a wit hin 0 .5 pH u nit s of t he pH u se d in th e sep ara ti on. Bu f feri ng io ns of o pp osi te cha rge m ay ta ke pa r t in th e ion e xch ang e pro ces s and caus e local distu rbance s in pH.
p. 8 Ta b l e 3 . Buf fers for anion exchange chromatography. pH in ter va l Sub st anc e Co nc . (mM ) Co unte r-io n pK a (25 ° C ) 1 4.3–5.3 N-Methylpiperazine 20 Cl - 4. 75 4.8–5.8 Piperazine 20 Cl - or HC OO - 5.33 5. 5– 6.5 L-His ti din e 20 Cl - 6.
p. 9 Fig 3. Recommended buffer substances for anion exchange chromatography. Th e colu mn s can be o pe rate d wi th a sy rin ge, p eri st alt ic pu mp o r a chromatography system. 3. Operation Buff er preparation Wate r and c hem ica ls us ed fo r buf fe r pre par at ion s hou ld be o f hig h pur ity .
p. 10 Ta b l e 4 . Prep ack ed col umn s for d esa lt ing a nd bu f fer e xcha ng e. Code No Column Loading volume Elution volume Comments Application 17 - 1408 -01 Hi T rap 0.1– 1. 5 ml 1. 3– 4.0 m l Pr epa cke d wit h For de sa lti ng an d bu f fer De sal ti ng Se pha de x™ G-25 exch ang e of p rote in Super f ine.
p. 11 Purifi cation 1. Fi ll th e syr ing e or p ump tu bin g wi th s tar t b uf fer ( lo w io nic s tre ngt h ). Rem ove t he s top per a nd co nne ct t he co lum n to th e syr ing e ( wit h th e pro vid ed a dapt or) , “dro p to dro p” to av oid i ntr odu ct ing a ir in to th e colum n.
p. 12 Note: If a P1-pu mp is u sed a m ax f lo w rat e of 1 –3 ml/m in ca n be r un on a Hi T r ap 1 ml co lu mn pa cked w it h Sep har ose H igh P er for ma nce media.
p. 13 Further optimization Th e reco mme nd ati ons g ive n abo ve wi ll gi ve a sou nd b asi s for de vel opi ng a n ef f ici ent p uri f ica tio n st ep.
p. 14 Elution with stepwise ionic strength gradients Step wi se el uti on i s the s equ ent ia l use o f the s ame b uf fe r at di f fere nt io nic st ren gt hs. I t is te chn ical ly si mpl e and f as t, an d is su ita ble f or syr in ge op era tio n.
p. 15 – A p eri st alt ic pu mp an d a gra die nt mix er e.g . pu mp P- 1, gra die nt mix er GM- 1 . – A o ne pu mp sy ste m, e.g . ÄK T A pr ime ™ plus. – A t wo pu mp sy st em, e. g FPLC or ÄK TA. 1. Choose s tarting conditions as outlined under Optimizing star ting conditions.
p. 16 Fig 4. Bind in g cap aci ty of hu man I gG , HSA an d hum an t ran sfe rr in at d if fe rent p H´s on Hi Trap Q HP , 1 m l. 4. Ap pl y the s amp le s olu tio n to th e col umn w it h a pum p or a syr in ge, at a f low r ate e qua l to th e fl ow ra te to b e use d in t he pu rif i cat ion m et hod .
p. 1 7 7. Scaling up For q uic k scal e- up of pu ri f icat io ns ( bac k pre ssu re wil l inc rea se ), t wo o r th ree Hi T rap i on ex chan ge co lum ns of t he sa me ty pe ca n be co nne ct ed in s er ies .
p. 18 Rel ate d pro duc t s No. S upp lie d Co de No . Hi T rap I EX Se le ct ion K it 7 x 1 ml 17 - 60 02- 33 Hi T rap D es alt in g 5 x 5 ml 17 - 1408 -01 Hi T rap D es alt in g 100 x 5 m l* 11-0 00.
p. 19 Realated literature Ion Exchange Chr omatography & Chromatofocusing Handbook, Principles and Methods 1 11 - 0004-21 Io n Exc han ge Co lu mns a nd Me di a, Sel ec ti on Gu ide 1 18 - 1127 -3.
HiTrap, Sepharose, Sephadex, FPLC, ÄKT A , ÄKT Aprime, ÄKTAdesign, Dr op Design, NICK, NAP , HiPrep and HiLoad are trademarks of GE Healthcare companies.
Un punto importante, dopo l’acquisto del dispositivo (o anche prima di acquisto) è quello di leggere il manuale. Dobbiamo farlo per diversi motivi semplici:
Se non hai ancora comprato il GE Q HP è un buon momento per familiarizzare con i dati di base del prodotto. Prime consultare le pagine iniziali del manuale d’uso, che si trova al di sopra. Dovresti trovare lì i dati tecnici più importanti del GE Q HP - in questo modo è possibile verificare se l’apparecchio soddisfa le tue esigenze. Esplorando le pagine segenti del manuali d’uso GE Q HP imparerai tutte le caratteristiche del prodotto e le informazioni sul suo funzionamento. Le informazioni sul GE Q HP ti aiuteranno sicuramente a prendere una decisione relativa all’acquisto.
In una situazione in cui hai già il GE Q HP, ma non hai ancora letto il manuale d’uso, dovresti farlo per le ragioni sopra descritte. Saprai quindi se hai correttamente usato le funzioni disponibili, e se hai commesso errori che possono ridurre la durata di vita del GE Q HP.
Tuttavia, uno dei ruoli più importanti per l’utente svolti dal manuale d’uso è quello di aiutare a risolvere i problemi con il GE Q HP. Quasi sempre, ci troverai Troubleshooting, cioè i guasti più frequenti e malfunzionamenti del dispositivo GE Q HP insieme con le istruzioni su come risolverli. Anche se non si riesci a risolvere il problema, il manuale d’uso ti mostrerà il percorso di ulteriori procedimenti – il contatto con il centro servizio clienti o il servizio più vicino.
